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一、公司定位：專注機制導向抗癌 / 抗感染藥物研發的合同研究組織
您是否需要對新型藥物、化合物或天然產物針對拓撲異構酶的潛在作用進行高度詳細且可靠的評估？我們可以提供幫助！
作為拓撲異構酶研究領域經驗超過 20 年的合同研究組織（CRO），TopoGEN 能快速交付清晰、可用于發表的實驗數據。我們將嚴格的實驗分析（僅使用純拓撲異構酶，絕不使用提取物）與戰略見解相結合，助力您揭示化合物的作用機制。我們的定價會根據您的項目需求定制，且所有實驗均包含陽性對照和陰性對照，不額外收費。我們承諾對實驗結果嚴格保密，并確保您擁有完整的數據所有權。從實驗設計到深度報告撰寫，我們始終是您的合作伙伴，助力您高效、經濟地實現具有發表價值的重要研究突破。
二、公司核心優勢
1.可靠專業實力：在拓撲異構酶靶向研究領域擁有 20 余年經驗，具備體外及體內實驗經驗，是該領域的合同研究組織。
2.可發表級結果：實驗數據清晰規范，包含嚴格的陽性對照與陰性對照，確保結果可直接用于學術發表。
3.高性價比與定制化服務：定價具有競爭力，且會根據您的具體項目需求調整；后續服務還可享受折扣優惠。
4.戰略支持：不僅提供檢測服務，還協助您進行實驗設計、數據分析及后續規劃，最終交付完整且歸您所有的數據資料包。
5.快速交付與絕對保密：實驗周期高效，確保您擁有完整的數據所有權，并可通過簽署保密協議（NDA）保護您的知識產權。
三、清晰明確的實驗結果
我們的實驗數據將為您規劃特定測試藥物的后續研發階段提供有價值的參考，且我們保證實驗結果清晰明確。若結果不理想，我們將自費重復實驗，直至獲得明確結果。
我們采用多層級測試方法，幫您節省時間與人力成本。該方法能快速評估藥物對靶點的潛在作用：
•若結果明確為陰性，則無需后續實驗；
•若檢測到陽性結果，我們將與您密切合作，設計合理的后續實驗步驟，以揭示作用機制細節（如界面毒物 IFP 或催化抑制化合物 CIC，詳見下文說明），且后續研究可享受折扣。
•無論何種情況，若實驗結果不明確，我們將免費重復分析，直至結果清晰無誤。
四、拓撲異構酶靶向藥物背景知識
拓撲異構酶是的有效抗癌藥物靶點，同時也是抗感染（抗生素）藥物的重要靶點。如果您研發的天然產物、合成化合物或半合成化合物能作用于拓撲異構酶通路（無論是拓撲異構酶本身，還是該通路中的其他環節），那么這種新型化合物在臨床上發揮療效的可能很高。當然，也存在一些限制因素，因為體內生理過程及獨特的藥代動力學特性可能會影響其臨床療效。盡管如此，初步證實化合物與拓撲異構酶存在特異性相互作用，仍是關于該化學物質重要且有價值的信息。
拓撲異構酶靶向藥物主要通過兩種已明確的機制發揮作用，這兩種機制通常具有不同的作用模式，但也可能存在共性。
（1）機制一：高度特異性的 “界面毒物"（IFP）
這是一種抑制作用，主要發生在拓撲異構酶與 DNA 發生協同切割和重新連接的過程中。關鍵在于，所有拓撲異構酶共有的切割 - 重新連接過程可視為切割狀態與連接狀態之間的平衡反應，其形式如下：
DNA / 拓撲異構酶→切割 DNA→DNA 完整性：連接狀態
拓撲異構酶以搜索模式結合 DNA（主要通過離子鍵、靜電力或氫鍵作用，詳見質量作用平衡左側），也就是說，這并非共價相互作用。一旦酶結合到合適的切割位點，切割反應隨即發生（紅色方框標注），隨后立即發生拓撲結構轉換（或連接數調整）。需要注意的是，切割反應發生后，DNA 底物與拓撲異構酶分子之間會形成共價鍵。切割中間體的存在時間極短，而作為協同步驟的快速重新連接對維持 DNA 完整性至關重要。
界面毒物（IFP）會使上述平衡向右側移動（大箭頭所示），從而更易形成切割復合物（此時 DNA 底物與拓撲異構酶分子間形成共價鍵）。典型的界面毒物（IFP）會推動平衡向右側移動，進而促進切割 DNA 中間體的形成。
（2）機制二：催化抑制化合物（CIC）
部分藥物可歸為催化抑制化合物（CIC）。這類藥物的特異性通常較低，主要作用是抑制拓撲異構酶的活性。ATP 酶抑制劑以及部分嵌入劑都屬于催化抑制化合物（CIC）。
五、服務支持
TopoGEN 的工作人員將與您或您的團隊緊密合作，設計最佳的實驗篩選方案，以識別潛在的界面毒物（IFP）、催化抑制化合物（CIC）或同時識別兩者。項目完成后，我們將繼續提供服務、咨詢建議及項目支持。
我們與客戶的合作關系不會隨著項目報告的交付而終止。在所有項目中，我們都會與客戶共同制定合理的 “后續計劃"。此外，由于我們設計的篩選方案能夠揭示陽性結果化合物的細微作用機制，因此通常只需少數關鍵實驗就能明確其作用機制（MOA）。具體而言，我們設計的實驗可在同一組反應中同時識別催化抑制劑和界面毒物（詳見第 3 頁 “實用背景知識" 部分），這意味著很高的成本效益。
由于我們會將實驗結果與已知的拓撲異構酶藥物（作為陽性對照）進行交叉比對，因此能獲得關于藥物作用機制的高度有意義的詳細信息。
為確保科學嚴謹性，我們會采取措施驗證每個實驗內部結果的一致性。例如，作為內部質量控制測試，我們通常會用喜樹堿（CPT）和依托泊苷（VP16）對拓撲異構酶 II 進行測試，以證明界面毒物（IFP）對前者具有特異性。
通常情況下，除非存在界面毒物（IFP），否則拓撲異構酶無法導致 DNA 性斷裂，但也存在一些例外情況。若實驗中拓撲異構酶與 DNA 的比例很高，即使沒有界面毒物（IFP），也可能觀察到一定程度的 DNA 斷裂。憑借豐富的經驗和專業知識，我們設計的篩選方案會特別注意避免這種潛在問題。例如，當人體拓撲異構酶 I 蛋白輸入量很高時，可能會檢測到不依賴于界面毒物（IFP）的切割反應；同樣，當大腸桿菌 DNA 促旋酶的用量達到化學計量過量時，即使沒有已知的界面毒物（如環丙沙星等氟喹諾酮類藥物），也可能誘導 DNA 雙鏈斷裂。
在多數情況下，我們了解到您的化合物會溶解在通用溶劑（如二甲基亞砜 DMSO）中。高濃度 DMSO 的使用存在風險，可能導致假陽性結果，但在我們的篩選實驗中絕不會出現這種情況，原因如下：
1.我們會針對每一批酶確定 DMSO 的使用上限；
2.我們會設置對照實驗，排除溶劑本身對實驗結果的影響。
六、成本效益分析
假設您正面臨一個決策：針對單一化合物的篩選，是選擇在內部實驗室進行，還是與我們合作？由于全球范圍內的人力成本及其他無形成本差異較大，很難一概而論，但我們可以提供一個大致的對比參考。
單一化合物針對Top I或 2的篩選
我們估算，在內部實驗室對單一化合物進行Top I或 Top2的篩選，僅材料、耗材和人力成本就會超過 4000 美元。這一費用涵蓋了材料耗材、人力、多套篩選試劑盒、對照藥物、相關標記物、酶、不穩定產品的干冰運輸、試劑盒的常溫運輸以及各種關稅等（僅列舉部分項目）。此外，這一估算還基于所有實驗一次成功，且您的團隊能獲得符合期刊同行評審或UPTO高標準證據要求的規范數據。
根據我們的經驗，一般研究人員往往需要投入大量額外人力來建立實驗方法，這會增加成本，且無法保證實驗成功。而 TopoGEN 提供的篩選服務，不僅成本約為內部實驗的一半，耗時也大幅縮短，還能確保交付清晰、可用于發表的實驗成果。您將獲得由專業人員出具的詳細實驗數據，他們具備豐富的常規操作經驗。我們的篩選項目已被證明具有很的成本效益，能助力您的科研工作快速推進，同時節省科研經費。我們通常能在幾個工作日內完成此類研究，并保證實驗結果符合要求。
六、靈活高效的篩選項目
我們的篩選項目提供快速交付服務，兼具成本效益與靈活性！
如果您需要定期研發新型藥物，可咨詢批量篩選服務。您可以預先確定一定數量的測試藥物，在符合您日程安排的時間段內享受優惠價格。我們將與您的化學團隊或工作人員協作，對新合成的化合物進行測試。通過這種方式，您既能享受批量篩選合同的價格優勢（針對多種化合物），又能在時間安排和測試控制方面擁有靈活性，從而與您的項目進度匹配，實現高成本效益。
雖然您可以使用我們的特色產品在內部進行篩選，但這并非總是切實可行的方案。針對兩種拓撲異構酶靶點對一種藥物進行篩選，內部實驗成本會超過 4000 美元，且無法保證獲得可用于發表的實驗成果。這其中很大一部分成本源于實驗方法的學習和掌握過程。
七、實時數據支持
當您將藥物篩選工作外包給 TopoGEN 時，我們首先會與您溝通，為項目設計最佳的實驗方案。若您關注特定靶點，我們會了解您是否需要識別界面毒物（IFP）、催化抑制化合物（CIC）或同時識別兩者。我們會為您提供真實的實驗數據示例，讓您清晰了解最終將獲得的實驗成果；同時，我們還會告知您完成研究所需的實際工作日（即交付周期）。
圖1：展示了針對未知測試藥物 A 和 B 進行的ToPO I靶向篩選的實際結果。在該篩選實驗中，我們明確證實藥物 B 是一種新型ToPO I 界面毒物（IFP）藥物。
注：圖1、ToPO I 藥物篩選實驗
采用超螺旋（SC）pHOT1 質粒 DNA（一種專為拓撲異構酶 I 篩選設計的專有底物）進行基于質粒的松弛實驗。實驗在不同濃度的測試藥物 A 和 B（各泳道上方標注了微摩爾濃度）存在或不存在的條件下進行。將反應產物和標記物上樣至含有溴化乙錠的瓊脂糖凝膠中，該凝膠系統能清晰分離拓撲異構酶 I 切割中間體（缺口開環 DNA，紅色三角形標注）。這種切割中間體僅在界面毒物（IFP）存在時才能檢測到。
已知的拓撲異構酶 I 界面毒物（IFP）—— 喜樹堿（10 微摩爾）作為陽性對照，其泳道中可觀察到切割產物的積累（對比含有喜樹堿的泳道 4 和不含藥物的泳道 6）。測試藥物 A 對 pHOT1 DNA 的松弛過程無影響（泳道 7 - 9 與無藥物對照泳道 6 對比）。相反，藥物 B 明顯是一種拓撲異構酶 I 界面毒物（IFP），缺口開環 pHOT1 DNA 的出現（紅色三角形標注）可證實這一點，且這些切割產物的產生具有明顯的藥物濃度依賴性。
值得注意的是，喜樹堿陽性對照（泳道 4）表明實驗系統運行正常，這讓您有理由相信陰性結果（泳道 7 - 9）的可靠性。
關鍵詞：TopoGEN, 拓撲異構酶, 拓撲異構酶I檢測試劑盒, 拓撲異構酶II檢測試劑盒, DNA修復試劑盒, 同源重組修復報告試劑盒, 拓撲異構酶抑制劑, 拓撲異構酶抗體, 藥物篩選試劑盒, 大腸桿菌拓撲異構酶IV, 人拓撲異構酶I, 人拓撲異構酶IIα, DNA底物, DNA切割靶標, 細胞環境DNA修復, 質粒轉染HR報告系統, 核提取試劑盒, 拓撲異構酶II條帶移位試劑盒, 抗菌藥物研發試劑盒, 癌癥化療藥物篩選, 真核拓撲異構酶檢測試劑盒, 原核拓撲異構酶檢測試劑盒, 拓撲異構酶活性檢測, DNA超螺旋分析, 藥物開發工具, 生命科學研究試劑, 拓撲異構酶相關疾病研究, 合同研究組織(CRO)服務
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